(3)中和试验：
使恢复期血清和已知 NDV 混合，使病毒感染能力被中和。
可用鸡，鸡胚，细胞(蚀斑法)等具感受性的宿主来进行。
(4)ELISA：非常敏感，改用微量法后引起了很多研究者兴趣。
(5)PCR：快速、敏感、特异、可区分强弱毒。
NDV 强弱毒的 PCR 鉴定
①原理：
F蛋白裂解位点(112位~117位)氨基酸组成和排列顺序的不同可区分强、弱毒株。
②鉴定 PCR：
设计了区别强、弱毒株的两组引物，强、弱毒株分别能扩增出 442、671bp的特异性片段和 252、671通用片段。
③RT-PCR+RFLP：
通用引物的RT-PCR方法可以从组织或粪便中直接检测到病毒(强毒或弱毒)，然后可以利用PCR产物的酶切分析(Pst/BbeI，利用F基因蛋白裂解位点的差异)对野毒株和疫苗进行鉴别。
(6)鉴别诊断
须与传染性支气管炎、传染性喉气管炎、禽流感、鼻炎支原体病等呼吸系统症状病区别，还须与禽脊髓炎、马立克氏病、禽霍乱及某些中毒病相区别
七、防制
(1)常规饲养管理措施
(2)免疫接种
i是预防新城疫发生的关键。
ii 常用疫苗有弱毒活苗(抗体HI滴度可达到2的9次方)。
iii 灭活油乳剂苗(抗体HI滴度可达到2的12次方)。
iv 抗体滴度超过 2的13次方可能感染了野毒。
v 应根据母源抗体水平和当地疫情合理安排免疫程序合理做好预防接种工作，增强鸡群的特异免疫力。
?免疫效价与保护率的关系
HI滴度≤2 攻毒后100%死亡
HI滴度3~5 攻毒后死亡率10%
HI滴度4~6 攻毒后不死亡
HI滴度6~8 攻毒后减蛋严重、康复后滴度达14以上
HI滴度9~11 攻毒后不减蛋、康复后滴度达11~12
HI滴度11~13鸡群可以保持无减蛋危险达6个月以上
常用疫苗
(一)疫苗的性质
中等毒力疫苗：I系苗或称 Mukteswar株弱毒苗：①Ⅱ系苗或称 HB1 株
②Ⅲ系苗或称F株
③IV系苗或称 LaSota株
④V4弱毒苗
(二)疫苗的使用对象及方法
中等毒力的疫苗(I系)
1、疫产生快，免疫持续时间长，保护力强
2、主要应用于有基础免疫的鸡群作加强免疫
3、注意：慎用I系
Ⅱ系和Ⅲ系疫苗
1、安全，特别适用雏鸡免疫，免疫期短
2、本疫苗可用滴鼻、点眼、气雾等方法免疫
3、不耐饮水
4、免疫原性较差
IV系疫苗
1、毒力较强，免疫原性好，可突破母源抗体，抗体效价高
2、世界各国广泛应用于7日龄以上雏鸡免疫
3、常采用滴鼻点眼、饮水、气雾或肌注方式免疫。雏鸡首免应滴眼或滴鼻
4、Clone30最早是荷兰研制者应用克隆技术，对IV系苗优化制成。其免疫效果与IV系苗相似而毒力较温和，从1日龄雏鸡至成年鸡均可使用V4(耐高温株)
V4系疫苗
1、用热带NDV 自然弱毒株的克隆而制成，具有良好的安全性、免疫原性和耐热性，可常温保存。
2、可以通过饮水、滴鼻、肌肉注射等方式免疫。
3、V4苗还具有自然传播性，产生的血清抗体较高，具备抵抗强毒攻击的能力，是防制ND的理想弱毒株。
4、目前在国外广泛应用，国内应用相对较少。适用于热带、亚热带地区散养鸡群。
(三)接种途径
1、点眼或滴鼻：适用于活疫苗，如Ⅱ系、Ⅲ系、IV系和克隆株免疫
2、肌肉接种：适用于I系苗和灭活苗
3、饮水法：用于活疫苗，进行二次免疫和产蛋阶段的增强免疫
4、气雾法：用于活疫苗，其适用于大群蛋鸡的二次免疫和暴发ND时的紧急接种
(四)免疫程序
1、免疫程序的制定原则
疫苗接种先弱后强，提倡1日龄局部免疫及活死苗联用、保持鸡群较高的抗体滴度、使用联苗。无现成程序可用，须结合本场特点。根据鸡群HI抗体效价确定初免和再免时间。
2、确定首免日龄
首免日龄\u003d4.5×(1日龄HI滴度-4)+5.0.5%采样测HI均值，平均检测HIs1:16，就应免疫
发病老场：1~7 日龄即以弱毒苗进行局部免疫同时进行灭活苗注射接种(原因)
3、第二次免疫距第一次免疫7~10天
?免疫特点
·当疫苗株与流行株的基因型一致时，其不仅能提供理想的临床保护，而且能显着降低免疫鸡的强毒感染率和排毒量。
·当疫苗株与流行株的基因型不一致时，虽然免疫鸡攻毒后不发生死亡，但不能抵抗新城疫病毒强毒的感染，免疫鸡在攻毒后仍能排毒。
?免疫检测
·HI抗体的均匀度及平均滴度都相当重要，即使平均滴度已很高，而其中仍有部分鸡的滴度很低时，一般都必须进行加强免疫接种。
·局部粘膜免疫、全身循环抗体与抗感染的关系：粘膜抗体阻止病原入侵，循环抗体中和病原的致病作用。
(五)免疫注意事项
1、免疫抑制疾病
2、雏鸡母源抗体(＜2的5次方)
3、流行毒株与疫苗匹配性
4、抗体水平与免疫时间
5、疫苗质量，疫苗干扰
6、接种操作
7、谨慎用抗菌药(氯霉素、磺胺)
8、饲养管理(营养)
?思考题
新城疫的临床症状是什么？病理变化？
新城疫的免疫预防？
